分光光度法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第51页（1027字）

分光光度法是测量物质吸收或辐射强度的分析方法，或称吸收光谱法，其基础是比色分析法。分光光度法像比色分析一样，是测量具色溶液对光的选择吸收方法。分光光度法是使用分光能力很强的单色器，如棱镜或光栅代替光电比色计中的滤光板，可以连续地得到波长范围很窄或更近于单色光的各种波段的光线。这样就可以连续地研究物质对各种波长的光的吸收性质。

在比色分析中，让一种单色光通过被测定的溶液，然后测定其吸收。在吸收光谱分析中，则是让一个光谱区域中的每一个单色光，分别依次序地通过溶液，来分别测定溶液对每一光波的吸收，然后绘制吸收-波长曲线。这样的曲线称为吸收光谱曲线。物质对光的吸收性质，可用吸收曲线来描写。在曲线中光密度A最大时的波长(λ_m)，称为最大吸收。可见及紫外光区的吸收光谱，称为可见及紫外吸收光谱。吸收光谱来源于物质对光的选择吸收。

利用分光光度计，可以使通过溶液的光束更加接近于单色光，而大大减少杂色光，增加溶液的总吸光率。溶液中其他颜色物质的干扰作用也可以大大减少或消除。因而分光光度法与比色分析法比较，其准确度、灵敏度都有很大提高。在两种甚至两种以上的有色物质同时存在时，只要它们的吸收曲线不是十分重迭，就可以选用适当两个波长的光，对它们同时加以测定。

利用分光器不仅能将可见光区的光分开，而且选用不同单色器，也可将紫外区和红外区的光进行分光。比色分析及分光光度法一般皆限于真溶液的测定。

国产72型和721型分光光度计是属于可见分光光度计一类的仪器。721型、WFD－72型与72型不同点在于前者采用了晶体管放大线路和电表直读的结构，较灵巧方便。国产紫外分光光度计主要有751型和WFD-G型两种，它们都是单光束、手录式的。WFD-G型紫外-可见分光光度计是采用光栅作分光器的。适用波长范围200－800纳米(nm)即2000－3000埃(A)。751型分光光度计是棱镜式分光光度计，适用波长范围为200－1000nm，包括紫外、可见和近红外区。与751型相近的国外分光光度计有希尔格(Hilger)H－700型，尤尼肯(Unicam)SP－500型，岛津QR－50型，贝克曼(Beckman)DU型以及型等。