别尔特朗法测定还原糖

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第608页（2055字）

(一)适用范围 别尔特朗法测定还原糖是经典的测糖方法，结果比较准确可靠，和所有测糖方法一样，须严格遵守操作规程。本法属大量法，测糖范围为20m1待测糖液中含糖50－80mg。

(二)试剂配制

1．斐林试剂：斐林试剂A为4%CuSO₄溶液：称取40g硫酸铜，加水溶解，过滤，稀释至1L。

斐林试剂B为20%酒石酸盐溶液：称200g酒石酸钾钠，150g氢氧化钠，加水溶解，稀释后过滤，加水定容至1L。

用前将A、B按体积1∶1混合备用。

2．0．1NKMnO₄标准溶液：称取1．6－1．7g高锰酸钾，加水溶解后，移入1L容量瓶中，稀释至刻度，贮于玻璃塞的棕色瓶中。KMnO₄溶液易被水中有机物质或空气中尘埃还原，致使溶液浓度发生改变，所以应该在用前校正浓度。方法如下：

取化学纯的草酸钠(Na₂℃₂O₄)1－2g，在105℃烘2h后，放入干燥器中冷却，然后精确称取0．14－0．2g，放入250ml三角瓶中，加蒸馏水50ml，浓硫酸5ml，摇匀，加热至70－80℃，当草酸钠完全溶解后，用KMnO₄溶液滴定至微紫红色，保持1－2min不褪色即为终点。

3．硫酸铁的硫酸溶液：称50g化学纯硫酸铁Fe₂(SO₄)3·12H₂O溶于水中，加入109ml浓的H₂SO₄，用水稀释至1L。取此溶液20ml，加1－2滴0．1NKMnO₄，应呈现红色而不消失。如溶液褪色，表示有亚铁存在，此试剂不宜使用。

4．碘—碘化钾溶液：2g碘化钾溶于5m1水中，溶解后加1g碘，用水稀释至900ml，贮于棕色玻瓶中。

5．石棉制备：取品质良好的石棉，用硝酸及高锰酸钾溶液久煮，然后用草酸钠还原高锰酸钾，再用水洗净至无草酸钠为止(用CaCl₂鉴定草酸根离子)盛于干净瓶中，加水贮存备用。

(三)测定步骤

1．水溶性糖的水浸提：称取洗净、擦干混匀的新鲜样品25－100g，置于研钵或捣碎机(杯)中捣碎，然后经带短而粗管子的漏斗，倒入250ml三角瓶中，将秤瓶和漏斗用水洗几次，使瓶内水达约150ml，摇动瓶子并放入80℃水浴中保温半小时，俟冷却至室温后，加甲基红2－3滴，若显酸性，可用0．1NNaOH中和至刚显黄色。滴加2－10m110%中性醋酸铅以沉淀蛋白质，静置片刻，待上部溶液澄清后，再滴入0．5－1ml醋酸铅溶液，看是否还有蛋白质沉淀产生，若有沉淀，则必须继续加至无沉淀为止。然后将溶液过滤到250ml容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶及沉淀，加水至刻度，摇匀。溶液中过量的醋酸铅可与果糖结合生成铅盐，干扰测定，故应除去，为此，可吸取已除蛋白质的清液50ml，放入100ml容量瓶中，逐滴加入饱和Na₂SO₄5－7ml，至不再产生白色硫酸铅沉淀为止。加水至刻度摇匀。静置片刻，上部清液待用。

2．用吸管吸取澄清滤液20ml(使含糖在50－80mg之间)，放入250ml烧杯中。加入40ml新配制的斐林混合液，搅动均匀后盖上表面皿，在石棉网上迅速加热使沸腾，严格保持沸腾3min。加热后溶液应呈蓝色，表明有多余的试剂硫酸铜存在，否则表示糖量过大，必须吸取少量糖液(须加水使仍达20ml)重做。取下后静置1min，用预先铺好石棉的古氏坩埚，以倾泻法过滤。用水洗涤，直至滤液用10%BaCl₂检查无白色沉淀(BaSO₄)为止。由于Cu₂O极易被空气氧化，洗涤时应保持Cu₂O上面有一水层。洗完后，取下坩埚，放入原烧杯中。用量筒加入硫酸高铁溶液20－30ml，用玻棒搅动，使沉淀全部溶解。此时溶液应呈蓝绿色。立即用0．1N高锰酸钾标准溶液滴定至淡红色保持1min不褪色为止。全部滴定时间不应超过20min。

(四)结果计算

由铜重查别尔特朗表(表27－1)得葡萄糖毫克数。

式中：NKMnO₄——KMnO₄的浓度；

VKMnO₄——KMnO₄的毫升数；

1000——将样重克换为毫克；

中取20ml测定。