亚硝酸钠

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第141页（9396字）

分子式：NaNO₂

相对分子质量：69．00

一、亚硝酸钠的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 硫酸亚铁 80g／L溶液(用煮沸后冷却的水制备)。

1．2 盐酸 (1+3)溶液。

1．3 冰乙酸。

2．操作步骤

2．1 亚硝酸盐。

2．1．1 取适量的3g／L试样溶液，加盐酸溶液后加热，应放出红棕色气体。

2．1．2 取1mL3g／L试样溶液，加冰乙酸呈酸性后，加新配制的硫酸亚铁溶液，应显棕色。

2．2 钠盐 用盐酸润湿的铂丝，在无色火焰上灼烧至无色，再蘸取少许试样溶液在无色火焰上灼烧，火焰应呈鲜黄色。

二、亚硝酸钠的含量测定

1．原理

在酸性溶液中，用高锰酸钾氧化亚硝酸钠，根据高锰酸钾标准滴定溶液消耗量计算出亚硝酸钠含量。

2．试剂和溶液

2．1 硫酸 (1+29)溶液。加热至70℃左右，滴加高锰酸钾标准滴定溶液至溶液呈微红色为止。冷却，备用。

2．2 硫酸 (1+5)溶液，配制方法同2．1。

2．3 高锰酸钾 约0．1mol／L(KMnO₄)标准滴定溶液。

2．4 草酸钠 约0．1mol／L(Na₂C₂O₄)标准滴定溶液。

称取约6．7g草酸钠，溶于300mL硫酸溶液(1+5)中，用水稀释至1000mL，摇匀，用高锰酸钾标准滴定溶液标定。

3．测定方法

称取2．5～2．7g试样，精确至0．0002g，置于250mL烧杯中，加水溶解，全部移入500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。在300mL锥形瓶中，用滴定管滴加约40mL高锰酸钾标准滴定溶液，用移液管加入25mL试样溶液，加入10mL硫酸溶液(1+5)，加热至40℃，用移液管加入10mL草酸钠标准滴定溶液，加热至70～80℃，继续用高锰酸钾标准滴定溶液滴定至溶液呈浅粉红色保持30s不消失为止。

4．分析结果的表述

亚硝酸钠(NaNO₂)质量分数w按式(6－1)计算：

式中 c——高锰酸钾标准滴定溶液的实际浓度，mol／L

V——加入和滴定用去高锰酸钾标准滴定溶液的总体积，mL

c₁——草酸钠标准滴定溶液的浓度，mol／L

V₁——加入草酸钠标准滴定溶液的体积，mL

w₁——测得的水分，%

．03450——每毫摩NaNO₂的质量，g／mmol

m——试样质量，g

三、食品中亚硝酸钠的测定

(一)格里斯试剂比色法

1．原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。

2．试剂和溶液

实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。

2．1 氯化铵缓冲液 1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20．0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调至pH9．6～9．7。

2．2 0．42mol／LZnSO₄溶液 称取120g硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)，用水溶解，并稀释至1000mL。

2．3 20g／L氢氧化钠溶液 称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。

2．4 对氨基苯磺酸溶液 称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。

2．5 1g／LN－1－萘基乙二胺溶液 称取0．1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。

2．6 显色剂 临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g／L)和对氨基苯磺酸等体积混合。

2．7 亚硝酸钠标准溶液 准确称取250．0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。

2．8 亚硝酸钠标准使用液 临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1．00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5．0μg亚硝酸钠。

3．仪器

3．1 小型粉碎机。

3．2 分光光度计。

4．测定方法

4．1 样品处理 称取约10．00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g／L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g／L)调样品pH8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0．5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。

4．2 测定。

4．2．1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0．0，0．5mL，1．0mL，2．0mL，3．0mL，4．0mL，5．0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0．0，2．5μg，5．0μg，10．0μg，15．0μg，20．0μg，25．0μg亚硝酸钠)，分别置于25mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4．5mL氯化铵缓冲液，加2．5mL60%乙酸后立即加入5．0mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。

低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0．0，0．4mL，0．8mL，1．2mL，1．6mL，2．0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0．0，2．0μg，4．0μg，6．0μg，8．0μg，10．0μg亚硝酸钠)。

4．2．2 样品测定：吸取10．0mL上述滤液(4．1)于25mL带塞比色管中，以下按4．2．1自“于标准管中分别加入4．5mL氯化铵缓冲液……”起依法操作。同时作试剂空白。

5．分析结果的表述

式中 x₁——样品中亚硝酸盐的含量，mg／kg

m₁——样品质量，g

m₂——测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg

V₁——样品处理液总体积，mL

V₂——测定用样液体积，mL

(二)示波极谱法

1．原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性的条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在弱碱性条件下再与8－羟基喹啉偶合形成橙色染料，该偶氮染料在汞电极上还原产生电流，电流与亚硝酸盐的浓度呈线性关系，可与标准曲线比较定量。

2．试剂

2．1 亚铁氰化钾溶液 称取106．0g亚铁氰化钾〔K₄Fe(CN)₆·3H₂O〕，用水溶解，并稀释至1000mL。

2．2 乙酸锌溶液 称取220．0g乙酸锌〔Zn(CH₃COO)₂·2H₂O〕，加30mL冰乙酸溶于水，并稀释至1000mL。

2．3 饱和硼酸溶液 称取5．0g硼酸钠(Na₂B₄O₇·10H₂O)，溶于100mL热水中，冷却后备用。

2．4 8g／L对氨基苯磺酸溶液 称取2g对氨基苯磺酸，用热水溶解，再加25mL1．0mol／LHCl，移至250mL容量瓶稀释至刻度。

2．5 1g／L08－羟基喹啉溶液 称取0．250g8－羟基喹啉，加4mL0．1mol／LHCl和少量水溶解，移至250mL容量瓶稀释至刻度。

2．6 0．10mol／LEDTA溶液 称取3．722gEDTA(C₁₀H₁₄N₂O₈Na·2H₂O)，加水30mL溶解，转入100mL容量瓶中用水稀释至刻度。

2．7 5%氨水 吸取28%的浓氨水5．00mL于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

2．8 亚硝酸钠标准溶液 准确称取0．1000g亚硝酸钠于硅胶干燥器中24h，加水溶解移入500mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于200μg亚硝酸钠。

2．9 亚硝酸钠标准使用液 准确吸取亚硝酸钠标准溶液5．00mL于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。再取10．00mL该稀释液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0．5μg的亚硝酸钠。

3．仪器

3．1 小型绞肉机。

3．2 JP－2A或JP-1A示波极谱仪。

4．操作方法

4．1 样品处理 称取5．00g经绞碎混匀的样品(午餐肉，火腿肠可称10．00～20．00g)，置于50mL烧杯中，加12．5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃的水300mL将样品洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液50mL，滤液备用。

4．2 测定 吸取3mL上述滤液于10mL容量瓶(或比色管)中，另取0．0，0．50mL，1．00mL，1．50mL，2．0mL，2．50mL，3．0mL亚硝酸钠标准溶液(相当于0．0，0．25μg，0．50μg，0．75μg，1．00μg，1．25μg，1．50μg亚硝酸钠)于10mL容量瓶(或比色管)中。于标准与样品管中分别加入0．20mL0．10mol／LEDTA溶液，1．50mL8g／L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静止3～4min后各加入1．00mL1g／L8－羟基喹啉溶液和0．5mL5%氨水，用水稀释至刻度，混匀，静止10～15min，将试液全部转入电解池中(10mL小烧杯)。在示波极谱仪上采用三电极体系进行测定(滴汞电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极)。

测定参考条件：

原点电位调节在－0．2V；

倍率为0．1(可以根据试样中亚硝酸盐含量多少选择合适的倍率)，含量高，倍率高，倍率选择在0．1以上；反之，倍率选择在0．1以下；

电极开关拨至三电极、导数档；

测量开关拨至阴极。

将三电极插入电解池中，每隔7s仪器自行扫描一次，在荧光屏上记录－0．5V左右(允许电位波动10～20mV)的极谱波高，绘制标准曲线比较。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中亚硝酸盐的含量，g／kg

m₁——测定用样液中亚硝酸盐的质量，mg

V₃——样品溶液的总体积，mL

V₄——测定用样液的体积，mL

m₂——样品质量，g

(三)微量亚硝酸根分光光度测定

1．原理

在弱碱性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与8－羟基喹啉偶合形成橙红色染料，与标准比较定量。

2．试剂和溶液

2．1 8g／L对氨基苯磺酸溶液 称取2．00g对氨基苯磺酸用热水溶解，再加25mL1mol／LHCl，移至250mL容量瓶并稀释至刻度。

2．2 亚铁氰化钾溶液 称取106g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000mL。

2．3 1g／L8－羟基喹啉溶液 称取0．25g8－羟基喹啉，加4．0mL1．0mol／LHCl和水溶解，移至250mL容量瓶稀释至刻度。

2．4 乙酸锌溶液 称取220g乙酸锌，加30mL冰乙酸溶于水，并稀释至1000mL。

2．5 1mg／mL亚硝酸根标准溶液 称取0．1500g亚硝酸钠(A·R)于小烧杯中，用水溶解，移至100mL容量瓶中稀释至刻度，保存在冰箱中。同时逐步稀释成1μgNO₂^－／mL。

2．6 饱和硼砂溶液 称取5g硼酸钠溶于100mL热水中，冷却后备用。

2．7 氨水(5+95)。

3．仪器

3．1 紫外－可见分光光度计。

3．2 石英比色皿2cm。

3．3 25mL容量瓶。

3．4 小型绞肉机。

4．测定方法

4．1 样品处理 称取香肠5．0g经绞碎混匀的样品，置于50mL烧杯中，加12．5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃的水300mL将样品洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置0．5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液50mL，滤液备用。

4．2 准确吸取15mL样品处理液于25mL容量瓶中，另取0．00，0．50mL，1．00mL，1．50mL，2．00mL，2．50mL，3．0mL，3．5mL亚硝酸根标准溶液，分别置于25mL容量瓶中，加入3．7mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静止2～3min后，加2．50mL8－羟基喹啉溶液、1．30mL氨水(5+95)，用水稀释至刻度，摇匀，静止10min，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长500nm处测吸光度，绘制标准工作曲线。

4．3 分析结果的表述

式中 x——样品中亚硝酸盐的含量，mg／kg

m——样品质量，g

m₁——测定用样液中亚硝酸盐的质量，g

5．说明

本方法在香肠中回收率为98%～105%。阳性样品用本法和极谱法测定，结果无差异。

(四)微量亚硝酸根极谱测定

1．原理

在弱碱性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与8－羟基喹啉偶合成橙红色染料。该染料可在汞电极上放电，产生的电流(波高)与亚硝酸根浓度呈线性关系，根据工作曲线法定量。

2．试剂和溶液

2．1 8g／L对氨基苯磺酸 称取2．00g对氨基苯磺酸用热水溶解，再加25mL1．0mol／LHCl，移至250mL容量瓶并稀释至刻度。

2．2 1g／L8－羟基喹啉溶液 称取0．25g8－羟基喹啉，加4．0mL1．0mol／LHCl和水溶解，移至250mL容量瓶并稀释至刻度。

2．3 1mg／mL亚硝酸根标准溶液 称取0．1500g亚硝酸钠(A·R)于小烧杯中，用水溶解，移至100mL容量瓶中并稀释至刻度，保存于冰箱中。同时逐步稀释成1μgNO₂^－／mL。

2．4 氨水(5+95) 以上试验用水均为二次石英蒸馏水。

3．仪器

3．1 JP-1A型示波极谱仪 三电极体系导数档。

3．2 82－1型新示波伏安仪(浙江丽水无线电厂)。

3．3 721型分光光度计。

4．测定方法

4．1 取不同量的NO₂^－标准溶液于10mL容量瓶中，加入1．5mL对氨基苯磺酸，放置2min，再加1．0mL8－羟基喹啉，0．5mL氨水(5+95)，用水稀释至刻度。全部转入电解池杯中，于原点电位－0．20V扫描，记录－0．58V处的导数极谱图。根据极谱波高与亚硝酸根浓度绘制工作曲线。

4．2 共存离子影响的测定对于5μgNO₂^－，下列离子的量(mg)不干扰测定：K、Na、C1、NO₃、SO₄、PO₄、S₂O₃、Ca、Se(Ⅳ)、As(Ⅲ)、Pb、Cd、Mg、Zn、Fe、Cu。本体系允许1×10^－3mol／LEDTA存在，所以在Mg、Zn、Fe、Cu含量较高时，可以加EDTA掩蔽。

4．3 样品分析。

4．3．1 样品处理 称取香肠5．0g经绞碎混匀的样品，置于50mL烧杯中，加12．5mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃的水300mL将样品洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷至室温，然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置0．5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液50mL，滤液备用。

4．3．2 测定：取滤液2．0mL，加少量EDTA及底液按上法进行极谱测定，根据工作曲线计算NO₂^－含量。

5．说明

亚硝酸根浓度在0．005～0．6μg／mL范围内与波高呈线性关系。方法回收率平均99%。