L－赖氨酸盐酸盐
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第288页（6765字）
化学名：2，6－Diaminohexanoic Acid Hydrochlori
别名：L－2，6二氨基己酸盐酸盐。
结构式：
分子式：COH14NO2·HCl
相对分子质量：182．65
一、L－赖氨酸盐酸盐的鉴别
(1)取1%本品溶液5mL与0．2%水合茚三酮试液1mL，共热3min，应出现紫色。
(2)5%本品溶液呈现氯化物反应(见盐酸鉴别反应)。
二、食品中氨基酸的分析
(一)L－赖氨酸及L－赖氨酸盐酸盐测定
食品中几乎不存在天然游离的L－赖氨酸，因此测定结果仅是添加的L－赖氨酸。
1．试剂和溶液
1．1 乙醇99．5%(体积分数) 优级纯。
1．2 乙撑二醇甲基醚 分析纯。
1．3 盐酸35% 分析纯。
1．4 醋酸 分析纯。
1．5 醋酸钠·3H2O 分析纯。
1．6 柠檬酸·H2O 分析纯。
1．7 柠檬酸钠·2H2O 分析纯。
1．8 柠檬酸缓冲液(pH2．2) 称取19．6g柠檬酸钠·2H2O、16．5mL盐酸、正辛酸0．1mL、20mL硫代二乙二醇和4mLBRI．J－35溶液，加蒸馏水定容至1000mL。
1．9 柠檬酸缓冲液(pH5．28) 取柠檬酸钠·2H2O26．76g，柠檬酸·H2O6．1g，氯化钠4．5g，正辛酸0．1mL，BRIJ－35溶液4mL，苯甲醇5mL，用蒸馏水定容至1000mL。
1．10 三氯化钛 分析纯。
1．11 正辛酸 分析纯。
1．12 氯化钠 分析纯。
1．13 硫代二乙二醇 分析纯。
1．14 99．999%高纯氮。
1．15 茚三酮 分析纯。
1．16 茚三酮溶液 称醋酸钠·3H2O136g，冰醋酸25mL，加水溶解并定容至250mL，加乙撑二醇甲基醚750mL，通氮气20min，加茚三酮20g，再通氮气15min，使茚三酮完全溶解，然后加三氯化钛1．7mL，通氮气10min，使完全溶解，混合，用调压器调节压力到28kPa，保存。
1．17 苦味酸 优级纯。
1．18 BRIJ－35溶液。
1．19 苯甲醇 分析纯。
2．仪器
液相色谱氨基酸分析仪。
3．测定方法
3．1 测定条件。
填充剂：凝胶型强酸性阳离子交换树脂，平均粒径15．5μm，交联度10%；
柱和柱温：内径9mm，长100mm，55℃；
洗脱液：柠檬酸缓冲液(pH5．28)，流速为0．6mL／min；
反应螺旋管：内径0．5mm，长20m；
反应槽温度：98℃；
茚满三酮流的流速：0．3mL／min；
进样量：500μL。
3．2 样液的制备。
3．2．1 水溶性食品 准确称取相对含L－赖氨酸50～100mg的样品，用水溶解，定容至200mL，作测定用。
取此液2mL，加苦味酸10mL，此时若产生悬浊液，则须除去蛋白质，若无悬浊液，则作测定液用。
除蛋白质的方法：准确取蛋白质液50mL，加乙醇150mL，产生沉淀，过滤，残留物用20mL乙醇洗3次，洗液与滤液合并，在50～60℃水浴中浓缩至40～45mL，加水定容至50mL，作样品溶液用。
3．2．2 蛋白质食品 准确取含L－赖氨酸50～100mg样品，放离心管中，按1g样品加5mL、100℃的水，在水浴上加热15min，冷后，冷冻离心分离(5000r／min，10min)，取出离心液，残留物以最初加水量的2／3的量加入100℃的水，按同样操作重复3次，合并离心液，加水定容至200mL时，需减压浓缩至180～190mL，再定容至200mL，必要时过滤，作样液用。
样液约2mL中加苦味酸溶液10mL，产生悬浊液时，按水溶性食品中除蛋白质的方法除去，作样液用。不含悬浊液时，直接作样液用。
3．2．3 油脂食品 一般按蛋白质食品同样操作，制备样品液。然而，在离心分离时，要将分离液的油层和水层分开，当分离液乳浊显着时，进行脱脂后作样液用。
脱脂方法：将离心液定量移入分液漏斗，加入乙醚或己醚：正己烷(2∶1)混合液50mL，重复脱脂2次，取水层，在水浴上加热除去乙醚或正己烷，加水定容至200mL，必要时过滤。
准确取样液10mL，加盐酸溶液调至pH2．2，准确加柠檬酸缓冲液(pH2．2)使成100mL，作测定用。
3．3 标准液的制备 准确称取L－赖氨酸124．9mg，加水溶解，定容至100mL。取此液2mL，用柠檬酸缓冲液(pH2．2)定容至100mL作标准液用，此液1mL含L－赖氨酸20μg。
4．分析结果的表述
在波长570nm测吸光度，以样液谱图和标准液谱图的面积比来计算。
式中 ms——标准L－赖氨酸盐酸盐的量，mg
m——样品质量，g
As——测定液所得谱图的L－赖氨酸峰面积
L－赖氨酸盐酸盐含量(%)=L－赖氨酸含量(%)×1．249
(二)同时测定18种氨基酸
20多种氨基酸中，有部分是入体不能合成或是合成量不能满足代谢需要的氨基酸，必须从食物补给，称为必需氨基酸(赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸及缬氨酸)。因此测定其含量及之间比例十分重要。
1．原理
所用的离子交换树脂一般为Na+型的(用X-SO3－Na+表示)，氨基酸离子(用+H3NCHROOH来表示)和强酸性活性基团(－SO3－)之间相互作用。由于氨基酸为两性集团，在酸性条件下，显+HN-CHRCOOH状态，被树脂表面活性集团(
)吸附，分段增加洗脱液的pH，能使氨基酸洗脱出来，酸性氨基酸与活性集团的亲和力最弱，最先被洗脱出来。其次是羟基氨基酸和中性氨基酸，最后是碱性氨基酸。
氨基酸经分离从柱中流出后与茚三酮溶液混合，反应液通过反应槽而被加热产生蓝紫色物质，用于比色测定，α－氨基酸最大吸收峰在波长570nm，而二级胺(脯与羟脯)产生黄色化合物，最大吸收峰在波长400nm以下，一般茚三酮在400nm以下有吸收，所以比色时通常波长在440nm，用分光光度检测器测定与标准比较定量。
另外，也可使氨基酸从分离柱流出后与OPA(邻－苯二甲醛试剂混合，常温下，在乙硫醇或β－巯基乙醇参与下，生成荧光衍生物，用波长338nm作激发，在波长425nm发射，荧光强度与标准物质对照定量，此法只能测一级胺；二级胺需用氧化剂氧化后，使环打开，成为一级胺，再与OPA生成衍生物测定。反应式如下：
2．试剂
2．1 缓冲溶液A 二水柠檬酸三钠19．6g，苯酚1g，用硝酸及水把总体积调至1L，pH为3．10，过滤(0．45μm)，并充氮。
2．2 缓冲溶液B 硼酸1．5g，硝酸钠21．0g，用水及6mol／LNaOH，调至总体积为1L，pH为9．60，过滤(0．45μm)，并充氮。
2．3 0．5mol／L硼酸钾保存液 取123．6g硼酸及105g氢氧化钾溶解在3．5L水中，再用氢氧化钾溶液调节pH至10．4，定容至4L，过0．45μm膜。
2．4 6mol／LHCl溶液。
2．5 茚三酮溶液：同本节(一)1．16。
3．仪器
氨基酸分析仪。
4．测定方法
4．1 盐酸水解法 组成蛋白质的20多种氨基酸以共价键(肽键)相连，样品处理的最终要求是将各肽键断开，释放出游离氨基酸，然后进行测定。
4．1．1 一般食物的盐酸水解：
4．1．1．1 称取一定量样品放入带密封垫的螺丝试管，使样品蛋白质含量在10～20mg。
4．1．1．2 固体样品加6mol／LHCl溶液15mL；液体样品加入等体积的浓盐酸。
4．1．1．3 加入新蒸馏的酚2～3滴。
4．1．1．4 充氮并紧盖试管。
4．1．1．5 将试管置110℃烘箱24h。
4．1．1．6 取出试管，用冷水冷却后，打开管盖，加入10mLAABA(内标氨基酸，2．5mm)。
4．1．1．7 将水解液移入25mL容量瓶中，用水淋洗试管，定容。
4．1．1．8 过0．45μm膜，取滤液1mL，待测定用。
4．1．2 高脂肪食品的盐酸水解：除去脂肪，再进行常规的蛋白质水解，减少测定的干扰。
4．1．2．1 将样品5g加100mL丙酮：氯仿(3：1)搅匀，在室温下用超声波振荡1h。
4．1．2．2 用滤纸过滤，固体部分吹干，称量，按上次进行水解。
4．2 半胱氨酸及蛋氨酸的样品处理。
4．2．1 原理：用盐酸水解蛋白的过程中，半胱氨酸及蛋氨酸易被破坏，用过甲酸将蛋白中的半胱氨酸(胱氨酸)及蛋氨酸分别氧化成半胱磺酸及蛋氨酸砜再进行测定。
4．2．2 过甲酸的制备：1体积30%过氧化氢溶液与9体积的88%甲酸混合，放置1h，其间摇匀，放冰浴中30min，立即使用。
4．2．3 方法：
4．2．3．1 称取一定量样品到水解管中，使样品蛋白质含量为10～20mg。
4．2．3．2 置样品为冰浴中30min。
4．2．3．3 加入10mL冷的过甲酸溶液，摇匀，旋紧管盖。
4．2．3．4 置冰浴中(0℃)16h。
4．2．3．5 加入3滴辛醇，慢慢加入48%冷的氢溴酸3mL，不断摇匀，保持0℃30min。
4．2．3．6 减压蒸干。
4．2．3．7 如前法进行盐酸水解。
4．3 色氨酸碱水解法。
4．3．1 原理：蛋白在4．2mol／LNaOH溶液水解，调节pH后，利用离子交换法或反相色谱法分离，并以紫外或荧光检测。
4．3．2 试剂和溶液步骤如下：
4．3．2．1 4．2mol／LNaOH溶液，吹氮气10min除去溶解在溶液中的氧气。
4．3．2．2 盐酸 分析纯。
4．3．2．3 1－辛醇 分析纯。
4．3．3 方法：称取一定量样品在水解管中，样品蛋白质含量在10mg左右，加10mL4．2mol／LNaOH溶液，3滴1－辛醇；充氮，盖紧管盖，于110℃，水解20h，冷却，用盐酸中和，稀释至50mL，上机。
4．4 色氨酸的甲磺酸水解法 称取一定量样品到水解管中，使样品含蛋白量在5～10mg，加入200μL4mol／L甲磺酸，1mL蒸馏水，充氮，盖紧盖，于110℃、24h。取出，用冷水冷却后，加入220μL4mol／LKOH溶液中和；加入1mLAABA(2．5μm)为内标，将水解液移入10mL容量瓶中，用蒸馏水淋洗试管并定容。取出1mL样品液，过0．45μm膜，滤液测定用。
4．5 测定 氨基酸自动分析仪开机稳定后，样品液及标准液可上机检测。根据样品峰高与标准比较计算。