甲型肝炎的病原学和特异性诊断

出处：按学科分类—医药、卫生 军事医学科学出版社《病毒性肝炎防治手册》第3页（2369字）

1973年Feinstone等应用免疫电镜技术在甲型肝炎患者的粪便中观察到甲型肝炎病毒(HAV)；1979年Provost在恒河猴胚肾单层细胞上培养HAV成功；我国1978年在北京、上海等地也从甲型肝炎患者的粪便中找到了HAV。

一、生物学性状

(一)HAV的形态结构

HAV属微小核糖核酸病毒，归类为微小RNA病毒科肠道病毒72型。HAV直径27～32nm，呈正二十面体立体对称颗粒，无包膜。病毒表面有32个亚单位结构，称壳粒。每个亚单位具有4个多肽，分别为病毒蛋白VP₁、VP₂、VP₃和VP₄，HAV平均浮密度为1．33～1．34g／cm³，而浮密度为1．29g／cm³的颗粒几乎全部是空心颗粒。完整病毒颗粒在蔗糖梯度离心中的沉降系数为75～90s。

(二)细胞培养与动物实验

HAV可在多种细胞中生长繁殖，包括某些人、灵长类动物的原代细胞株或传代细胞系和半传代细胞株。通过动物试验证明，黑猩猩、南北狨猴和恒河猴对HAV易感。动物接种感染后1～2周肝细胞内证实有HAV存在，在接种后20～25d达到高峰，持续存在8周。接种后12d出现病毒血症，为期短暂，未发现有慢性病毒血症存在。粪便中HAV的排出在丙氨酸转氨酶(ALT)上升达高峰时或黄疸出现前开始。

(三)病毒复制

HAV经口侵入人体，在肝细胞浆内复制，HAV可感染邻近的肝细胞，或含有HAV的囊泡从肝细胞中释放出来而进入毛细胆管，当该囊泡与胆酸接触时，囊泡膜溶解，HAV被释放。

(四)HAV毒力的分子基础

急性甲肝患者粪便中的HAV HM－175株，经过32次细胞培养传代后，对黑猩猩的毒力消失，对狨猴的毒力也减弱。比较HAV HM-175野毒株与减毒的HAV HM－175／7MK-5核苷酸序列表明，其中24个核苷酸有变化，并导致12个氨基酸的改变。因此认为，HAV RNA病毒是由于基因组中相对小数量核苷酸改变的缘故。氨基酸改变出现在除3A和3C外的所有非结构蛋白中。

(五)HAV的稳定性

HAV无脂蛋白包膜，对有机溶剂有抵抗力。对酸、碱、乙醚、氯仿等有较强的耐受性。60℃1h不能完全灭活，加热100℃可完全灭活。它能耐受－20℃低温存活多年并保持其传染性，但不能耐受冷冻干燥。对紫外线敏感。1：4000甲醛作用72h，可使其失去感染力而保持免疫原性。1000ppm含氯消毒剂处理30min，可使其灭活。

二、特异性诊断

(一)检测急性肝炎患者血清抗-HAV IgM

甲肝特异性抗体出现较早，持续时间较短，消失较快，二次感染时不再出现，是甲型肝炎早期诊断的重要指标。甲肝患者发病最初3周内，几乎均可检出抗HAV IgM，2～3个月迅速下降，8个月后不易检出。将被检血清稀释至10^－3，几乎所有甲型肝炎都出现阳性。正常人血清稀释至10^－2仍为阴性。常用方法为酶免吸附试验(ELISA)和固相放射免疫试验(SPRIA)，其灵敏度高，特异性强，方法易于掌握。

(二)粪便中HAV或甲型肝炎抗原(HAAg)的检测

急性甲肝患者在潜伏期末和发病早期，为粪便排毒高峰期，故在前驱期和发病1周内采取粪便提取液，可检测HAV颗粒和HAAg。1988年上海甲肝流行中，采集入院患者的1084份大便标本，使用ELISA法测定HAAg，结果30%病例阳性。HAV检测用免疫电镜，一般不作常规检测。

(三)检测血清中抗-HAV IgG

抗-HAV IgG在急性期后期和恢复期早期出现(IgM开始下降时，IgG抗体逐渐上升)，可达很高水平(＞10^－4)，并可维持数年甚至终生。对于急性肝炎，如果恢复期血清浓度较急性期升高4倍以上，可以诊断为甲肝。

抗-HAV IgG的检测可采用ELISA或SPRIA法，主要用于检测人群免疫水平及流行病学研究。

(四)粪中抗-HAV IgA的检测

在急性甲肝的部分患者粪便提取液中可测得抗-HAV IgA。它常在HAV从粪中消失后才测得，并可持续几个月。Locarini从45名甲肝病例的54份粪便中，仅查出10份为阳性。因它的检出阳性率较低，该项检测可作为诊断急性甲肝的辅助项目。

(五)检测HAV-RNA

利用克隆的HAV-DNA片段制成探针，采用cDNARNA分子杂交技术可以检测患者急性期粪便和血清中的HAV-RNA。聚合酶链反应(PCR)问世以来，为HAV-RNA的检测提供了更为灵敏的手段。需采用逆转录PCR(RTPCR)法，先用逆转录酶将HAV-RNA转为cDNA，然后进行PCR检测。