耶辛氏菌属

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第264页（4254字）

本属杆菌有七个种(见表11-6)，有的为存在于自然界(如淡水)的非病原微生物，偶尔在卫生检验时遇见，与兽医微生物有关的病原微生物有4个种，即鼠疫耶辛氏菌(Y．pestis)、伪结核耶辛氏菌(Y．pseudotuberculosis)、肠结肠耶辛氏菌(Y．enterocolitica)及拉氏耶辛氏菌(Y．ruckeri)，皆为革兰氏阴性的卵圆状或球杆状的小杆菌，1～2×0．5～1μm；组织涂片中更易呈两极性染色(要注意与巴氏杆菌相区别，见表11-8)，是一个特征；在肉汤琼脂上生长良好，最适生长温度为28～37℃，最适生长pH为7．2左右；能运动的细菌，在37℃不运动，在25℃运动是另一特征；发酵糖类产酸不产气，第三特征是下列反应均为阴性：枸橼酸盐利用、V．P．、H₂S、KCN中的生长、丙二酸盐利用、液化明胶；乳糖通常不发酵，但ONPG是阳性，为此属第四特征；此外，过氧化氢酶为阳性，氧化酶为阴性，与肠杆菌科的其他细菌同。

四种致病性耶辛氏菌与多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌第Ⅰ亚属的区分如表11-8。

表11-6 常见沙门氏菌的

抗原结构与生化特性表

表11-8 四种耶辛氏菌与沙门氏菌第一亚属——多杀性巴氏杆菌的比较

* ……个别菌株阳性。

一、鼠疫杆菌(Y．pestis)

本菌为啮齿动物病原菌，并能严重地为害于人类。它对多种实验动物均有易感性，而对豚鼠最易感。此菌致鼠疫，在鼠类中经跳蚤传染，亦可因跳蚤叮人而传染到人。历史上曾发生多次鼠疫爆发，造成人类大批死亡。

本菌侵害淋巴与血管系统，使其发炎，淋巴结急性肿胀，充满炎症液体，呈紫色或出血性梗死。如病情稍长，淋巴结出现坏死并化脓。脾、肝均肿胀充血。肺型鼠疫则肺部出现大块坏死，周围有充血出血带。凡鼠类众多死亡时均应对其详细检查。

本病对人类为害极为严重，故对每一啮齿类的可疑病例，均应及时采取病变淋巴结、血液及其他标本，置密封的低温容器内送实验室检查。对获得的可疑培养物作生化检查和血清凝集试验外，还需接种豚鼠作动物试验(应于2～5天内死亡)。操作疑为鼠疫的材料，特别要小心。工作中消毒要严密，所用试验动物必须无外寄生虫，要防止感染、传播。

1．组织涂片观察 以姬姆萨、瑞特氏或韦森氏(Wayson′s)染色法染色，可见两极性，是其特征，但本属中其他细菌及巴氏杆菌属的其他细菌亦现两极性染色。

2．分离培养鉴定 本菌对营养要求不高，在普通琼脂上即可生长，但发育缓慢，24h形成小于1mm直径的小菌落。最适生长温度为20～30℃，此温度下长出的菌落易于沾取，表面干燥，而在37℃生长的菌落难于沾取，表面潮湿、粘稠。最适pH为6．9～7．1。在培养基内添加血液或血清，其生长更好。本菌不运动无鞭毛，有荚膜，不溶血，能在麦康凯琼脂上生长。不能分解蛋白质，其生长必须有蛋白胨或氨基酸，普通琼脂上长出淡灰白色、近乎透明、圆形隆起的小菌落，以扩大镜观察中心呈丘状，表面颗粒形，周边有宽窄不等、边缘不整的花边。肉汤中生长特别，表面有白色薄膜，底有絮状沉淀，肉汤透明，再静置培养4～5天后，有长丝自膜面下垂，似钟乳石状，有助于诊断。此菌不引起石蕊牛奶的变化，能还原美蓝、硝酸盐，其余生化反应见表11-6。

3．动物试验 取被检血液或磨碎的组织液皮下注射于豚鼠或小白鼠，此菌能致上述动物的死亡，快则越夜，慢则一周。典型病变为接种处有出血性炎症，局部淋巴节肿大，周围有胶样水肿，皮下充血，肝脾肿大并充血。病程较长时，肝、脾有白色粟粒样坏死灶，肺及其他脏器呈出血性炎症。

4．血清学试验

(1)间接红细胞凝集试验 系将鼠疫杆菌的F1⁽¹⁾抗原(荚膜抗原)结合在经鞣酸处理过的红细胞上，以能测定微量抗体的一种敏感、快速的血清学方法，其血凝抗体滴度在1∶20(试管法)或1∶16(微量法)以上时可判定为血凝阳性。试验动物于感染后5～7天开始产生血凝抗体，15～30天左右达高峰，其反应滴度可维持一年以上。

(2)反向间接红细胞凝集试验 用已知的特异性抗血清、丙种球蛋白或提纯的IgG致敏红细胞，来检查有无相应的抗原存在的方法。即从抗鼠疫荚膜抗原(F1抗原)的血清中，提取IgG，致敏红细胞，以此可检出每ml被检材料中含5～10个菌体的F1抗原量。本试验的敏感性较抗体中和反应、炭凝集反应均高，脏器浸出液经3～5%的甲醛处理，其抗原性不受影响。反向血凝不仅可检出活菌、死菌，且可检出水溶性抗原。试验证明，鼠疫动物尸体虽经腐败或干枯长达一年，反向血凝仍可检出鼠疫抗原，此法已在我国鼠疫自然疫源地调查中试用，有关试剂可向乌鲁木齐的新疆地方病研究所商购。

(3)荧光抗体法 取病变脏器的涂片或压片，自然干燥，加热固定，滴加鼠疫荧光血清染色，用荧光显微镜检查，如菌体周围有明亮的黄绿色荧光圈，则为阳性。此法可作鼠疫的快速诊断，目前尚未发现和异属菌种有交叉反应。有人证明，所有试验动物的组织涂片都适合作荧光抗体检查。

二、伪结核耶辛氏菌(Y．pseudotuberculosis)

本菌广泛分布于自然界，可感染啮齿类动物、家鸽、火鸡及金丝雀，家兔亦常出现本病，偶尔可感染牛、绵羊、山羊、马、猪、狐、水貂、猴和人类。一般通过污染的饲料或饮水引起感染。啮齿动物中的病型有几种。急性败血型，24～48h内死亡；肠道型，表现腹泻，消瘦，数周后死亡；淋巴节局部感染型，是家兔最常出现的病型，其肝脾等处可见白色圆形病灶，切开呈大小不等的干酪样坏死灶。肠系膜淋巴节肿大坏死，在病变结节内可分离到本菌。急性败血型者在血液内和内脏中能分得本菌。

病原特性：本菌为球杆状或短杆状，多形。22℃下的肉汤24h培养物能运动而37℃下的不运动(鼠疫杆菌是不运动的细菌)，用印度墨汁负染后现荚膜。从病料中分得的菌株在22℃下培养，琼脂表面菌落为S型，光滑湿润粘稠，而在37℃下培养，菌落为R型，菌落干而粗糙，边缘不齐，呈灰黄色。本菌在血平板上不溶血，不能在SS琼脂上生长。最适生长温度为30℃、pH为6～8。不凝固牛乳但能使之变碱，还原硝酸盐，还原美蓝，其余生化反应见表11-6。

检验步骤及方法：由于本菌对啮齿动物致病力强，可将被检材料或疑似菌落皮下或肌肉注射到豚鼠、兔、小鼠或大鼠，豚鼠或兔亦可作口服感。视菌数与细菌毒力，被感染动物多于3天～3周内死亡。急性败血症死亡的，可从血液及各组织分离出细菌；慢性死亡的，剖检时在肝、脾、淋巴节等处，可发现粟粒状似结核的结节，初以渗出性病变为主但很快发展成为中心凝乳状坏死，周边呈炎性细胞浸润，并可从病变处分得细菌。将分得细菌鉴定后可确诊。鉴定时注意表11-8所列项目，其中包括25℃及37℃下的运动力，及似结核的结节见于人工感染2～3周死亡后的啮齿动物特别是豚鼠。

三、肠结肠耶辛氏菌(Y．enterocolitica)

本菌为动物肠道及咽部寄生菌，曾引起人类肠道感染。有时群发而显得重要，仅偶尔引起山羊腹泻。曾从猪、牛、羊、猫、犬、鸡、鸭、鹅、蛇、鱼、蜗牛及多种啮齿动物中分得。

本菌的生物学性状与伪结核耶辛氏菌有些相似，为革兰氏阴性杆菌，可呈卵圆形、球杆状或短杆状，偶尔也呈丝状。较克雷伯氏菌略小，1～2×0．5～1．0μm。培养于30℃以下能形成周身鞭毛，呈滚翻旋转运动，而培养于37℃下无鞭毛无运动力，最适生长温度为30～37℃，4℃时亦可缓慢生长。

检验时可取肠淋巴节、粪便在麦康克琼脂上划线分离，24～48h形成约1mm直径的圆形无色菌落，SS琼脂上生长略慢。另取粪便加等量蒸馏水或盐水置4℃培养10～14天作冷增菌，再划线于麦康克琼脂上，如有此菌，则菌数增多，更易于分离。

生物鉴定本菌参阅表11-8及11-6，本菌不发酵乳糖、鼠李糖、密二糖及水杨苷等，分解葡萄糖、蔗糖等产酸不产气，不产生H₂S，多数分解尿素，V．P．试验在37℃下为阴性，而培养于22～30℃时可能为阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，精氨酸脱羧酶阴性，有五个生物型，见表11-9。

表11-9 肠结肠炎耶新氏菌生物型的区别

肠结肠耶辛氏菌对豚鼠、家兔、大自鼠多无致病性，仅少数菌株对小白鼠有致病力，根据其O抗原结构，最少有48个血清型，共中O₉与牛、羊、猪布氏杆菌，有极强的交叉凝集反应，可用间接血凝鉴定。

四、拉氏耶辛氏菌(Y．ruckeri)

本菌最早从患红口病的虹鳟(Salmo gairdneri)分得，并证实是该病的病原，以后从鲑鱼(Oncorhynchus tshawytscha)发现，可能还可感染其他鱼类，尚未在中国发现，故对进口鱼进行检疫，特别是从北美来的鱼。

此菌最适宜的培养温度为22℃，在营养琼脂或麦康克琼脂上均易生长，22℃下培养18h即呈现圆形约1mm不发酵乳糖的菌落，大小为1μm×2～3μm，若培养时间超过48h，可呈丝状。有5个不同的O抗原血清型。

鉴定此菌要点为该菌属肠杆菌科的细菌，似耶辛氏菌属，从病鱼分得，培养于22℃下能液化明胶和产生赖氨酸脱羧酶。

表11-10 耶辛氏菌属的七个种的比较