锌还原的紫外分光光度法(称差值法)

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第262页（2531字）

1．适用范围 本法适用于各类土壤，检测限为0．05ppmNO₃－N，工作范围以0．1－1．6ppmNO₃－N为宜。

2．试制配制(全部须用重蒸馏水配制)

(1)1molNaCl浸提剂：称NaCl58．44g溶于1L水中。

(2)10%(V／V)H₂SO₄溶液。

(3)镀铜的Zn粒：取约100gZn粒(二级纯)，用50ml1%(V／V)H₂SO₄溶液浸泡几分钟，洗净表面，再用水冲洗3－4次，沥干后，加入50ml水和25ml25%(W／V)CuSO4·5H₂O溶液，搅匀，放置约30min，使Zn粒表面镀上一层黑色金属铜。倾去CuSO₄溶液，用水洗涤Zn粒两次，再用稀H₂SO₄溶液(2ml10%H₂SO₄稀释至50ml)浸洗一次，最后用水冲洗4－5次，每次用水约20ml；晾干。

(4)－贮备标准溶液：称0．6068gNaNO₃或0．7219gKNO₃溶于1molNaCl浸提剂中，并稀释至1L。即为1ml含100μg硝态氮。

(5）－N标准溶液，上述标准溶液稀释10倍，即为10ppm标准液。

3．测定步骤 将相当于20．0g干土的新鲜土样放在250ml三角瓶中，加入100ml1molNaCl浸提剂。在室温下(25±5℃)加塞振荡30min。将土壤悬浊液倾入200ml离心管中，离心分离(3000转／分)3min，吸取清液存于三角瓶中。

吸取土壤浸出清液，注入1cm光径的石英比色槽中，在210nm处约测吸收值，以浸提剂为参比溶液，调节仪器的零点。根据约测结果，确定浸出液应予稀释的倍数，使稀释液的吸收值在0．1－0．8之间(即NO₃－N在0．2－1．6ppm之间)。

吸取25ml已稀释的待测液两份，分放于50ml三角瓶中，各加入1ml10%(V／V)H2SO₄溶液。在其中一瓶加4粒镀铜Zn粒(约重0．15－0．2g)。两瓶摇匀后放置过夜(约14h)。如用下述差减法测读吸收值，在每批测定时，须取25ml同浓度的NaCl溶液，加1ml10%H₂SO₄，同样放置过夜，作为空白参比值。

次日，任选下列方法之一测读溶液的吸收值。

(1)直读法：用滴管将锌还原和未还原的两溶液分别装入1ml光径的石英比色槽，在210nm处以已还原的溶液为参比液，调节分光光度计的零点，测读未还原溶液的吸收值，即为△A值，

(2)差减法：用滴管将锌还原和未还原的两溶液先后装入同一个1ml光径的石英比色槽，在210nm处以酸化的浸提剂为参比液，调节分光光度计的零点，分别测读吸收值。未还原的为A₁，锌还原后的为A₂，二者之差A₁－A₂即为△A值。

回归方程或工作曲线：吸取标准溶液1．00，2．00，4．00，6．00，8．00ml，分别用水定容至50ml，即为0．2，0．4，0．8，1．2，的标准系列溶液。各取25ml，加1ml10%H₂SO₄溶液后测读A₂₁₀，计算A₂₁₀对浓度的回归方程或绘制工作曲线。

4．结果计算 根据△A值，用回归分析方法计算或查工作曲线得待测液中的浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤含量(ppm)。

5．注释

①Cu²⁺在210nm处的吸收值很大，故镀铜的Zn粒用水洗后，还应在稀酸中浸洗几秒钟，借发生的细微氢气泡，将锌粒隙缝中残留的Cu²⁺清洗完全。

②为了计算应称取新鲜湿土样的重量，需同时测定土样的水分%。风干土样的水分则可略而不计。

③土壤悬浊液最好离心分离，不宜用滤纸过滤。因作者发现，土壤悬浊液如经过滤，A₂₁₀值显见增大，而且滤纸的质量越差，吸收值的增大越多。滤纸虽经水洗，也不能完全消除干扰。

④如果已知土壤的大约含量，则可不必进行这步约测，只需估算稀释倍数，使待测液中的。

⑤例如，约测时如浸出液的吸收值在1－2之间，须用浸提剂稀释2或4倍，土液比即为1∶10或1∶20。

为了节省浸提剂，也可改用水稀释，但在还原后用差减法测读吸收值时，也需用相应浓度的NaCl水溶液为空白参比液。

⑥直读法是直接测读两溶液吸收值之差，比较简捷，但每测一个土样即需调节一次仪器的零点，而且可能有两比色槽不全等而引起的仪器误差；差减法需两次读数，但不必逐次改调仪器零点，也没有比色槽产生的误差。大批样品测定时，以选用差减法为方便。实际测试结果表明，直读法用于低水平的土样时误差较小，差减法则适用于高水平的土样。

⑦待测液的盐浓度较高，最好用滴管吸取装入比色槽，以防溢出槽外，污染槽壁，影响其透光性。

⑧作者用标准系列溶液测读A₂₁₀的记录相应如下：

A₂₁₀值(y)对浓度(x)的回归方程为：

由A₂₁₀计算浓度C时，以用下式为方便：