棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法二)

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第214页（3848字）

山西省农业科学院植物保护研究所 秦曙 乔雄梧 朱九生 王静

样本用甲醇／5%氯化钠／1mol／L氢氧化钠混合溶剂提取，液-液分配，硅胶柱层析净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

普通摇床

分散器

固相萃取装置

超声波清洗器

2．主要试剂

乙腈(HPLC纯)、丙酮(重蒸)、石油醚(重蒸)、正己烷、甲醇、二氯甲烷、浓盐酸、氯化钠、氢氧化钠、醋酸铵

无水硫酸钠 600℃处理4h，冷却后用正己烷抽提4h，然后抽去多余溶剂，放在干燥器中备用

醋酸铵乙腈溶液 2%醋酸铵／乙腈(67∶33，V／V)

脱脂棉 用二氯甲烷抽提

滤纸 用甲醇洗涤后晾干备用

硅胶G 层析用，60型，筛余物W=38μm，130℃处理4h，加1．5%水减活。密封保存

硅胶柱 称取1．0g硅胶于具塞指形管中，加入10mL二氯甲烷／甲醇(75∶25，V／V)混合溶剂摇匀，倒入下端塞有脱脂棉的2mL玻璃注射器中，待硅胶沉降后，加0．5g无水硫酸钠，依次用10mL乙腈、10mL二氯甲烷和20mL正己烷预淋备用。

XDE-105FactorA标准品、XDE-105FactorB标准品、XDE-105FactorD标准品、B of D标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤、棉叶

称取20．0g混匀的土壤(棉叶100g用厨房多用机切碎混匀，称取10．0g)，置于250mL具塞三角瓶中，加60mL×2甲醇／5%氯化钠／1mol／L氢氧化钠(65∶27∶8，V／V／V)混合提取溶剂，超声提取5min，在普通摇床上以150r／min摇30min，提取两次，抽滤。再用15mL混合提取溶剂洗涤滤渣和抽滤瓶，合并滤液，并用混合提取溶剂定容至140mL。

3．1．2 棉籽

称取10．0g粉碎的棉籽，加60mL石油醚／丙酮(60∶40，V／V)混合提取剂，在普通摇床上以150r／min摇40min，后抽滤。将滤液用提取剂定容至60mL。取30mL转入250mL蒸馏瓶中，用旋转蒸发器(50℃)浓缩至干。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

3．2．1．1 土壤、棉叶

取70mL提取液，加70mL0．16mol／L盐酸／5%氯化钠混合溶剂摇匀，用1mol／L盐酸调节pH至2。用50mL石油醚振荡洗涤20～25s，弃去石油醚相。水相中加入10mL1mol／L氢氧化钠使pH至10～12。加50mL×3石油醚萃取，每次用力振荡25s。石油醚相经装有14．0g无水硫酸钠的漏斗过滤脱水。用15mL石油醚冲洗无水硫酸钠。合并石油醚相，用旋转蒸发器(50℃)浓缩至干，用10mL正己烷溶解，待柱层析净化。

3．2．1．2 棉籽

用50mL石油醚溶解，转入250mL分液漏斗中，先后用25mL甲醇／5%氯化钠(70∶30，V／V)混合溶剂和25mL0．04mol／L盐酸／5%氯化钠混合溶剂漂洗蒸馏瓶并倒入分液漏斗中，轻摇25s。分层后，弃去石油醚。收集下层水相和轻微的乳化层，加4mL1mol／L氢氧化钠使pH至10～12，用50mL×3石油醚萃取，每次25s。石油醚相经装有14．0g无水硫酸钠的漏斗过滤脱水。再用15mL石油醚冲洗无水硫酸钠，合并石油醚相，用旋转蒸发器(50℃)浓缩至干，用10mL正己烷溶解，待柱层析净化。

3．2．2 柱层析净化

3．2．2．1 土壤、棉叶

将样本溶液加入硅胶柱中，依次用正己烷(10mL、10mL、40mL)、5mL二氯甲烷和8mL乙腈洗瓶并用于淋洗，弃去。最后用8mL二氯甲烷／甲醇(3∶1，V／V)混合溶剂洗瓶并用于洗脱，将洗脱液收集在离心管中，氮气吹干，用1mL乙腈／甲醇／2%醋酸铵(1∶1∶1，V／V／V)混合溶剂溶解，测定。

3．2．2．2 棉籽

将样本溶液加入硅胶柱中，依次用正己烷(10mL、10mL、40mL)和乙腈(6mL×2)漂洗容器并用于淋洗，弃去。最后用8mL二氯甲烷／甲醇(3∶1，V／V)混合溶剂漂洗容器并用于洗脱。将淋洗液收集到离心管中，氮气吹干，1mL乙腈／甲醇／2%醋酸铵(1∶1∶1，V／V／V)混合溶剂定容，测定。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 250nm

色谱柱 Kromasil ODS，150mm×4．6mm，5μm

流动相 甲醇／乙腈／醋酸铵乙腈溶液(44∶44∶12，V／V／V)

流速 0．8mL／min

进样量 180μL

保留时间 XDE-105FactorA约为10．90min，D约为12．71min，B约为8．83min，B of D约为10．20min。

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

多杀菌素总残留量为XDE-105FactorA与D残留量之和。

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 3．6×10^－8g。

最低检测浓度 土壤、棉籽0．02mg／kg，棉叶0．1mg／kg。

回收率 土壤、棉籽和棉叶中添加XDE-105Factor A0．02～5．0mg／kg时，平均回收率为93．6%～111．7%；土壤、棉籽和棉叶中添加XDE-105Factor D0．02～1．0mg／kg时，平均回收率为85．4%～100．9%；土壤、棉籽和棉叶中添加XDE-105Factor B0．02～5．0mg／kg时，平均回收率为63．4%～78．8%；土壤、棉籽和棉叶中添加XDE-105Factor B of D0．02～5．0mg／kg时，平均回收率为66．8%～83．0%。见表1-31-6～1-31-8。

相对标准偏差 0．2%～14．8%，见表1－31-6～1-31-8。

表1-31-6 土壤中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果

表1-31-7 棉叶中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果

表1-31-8 棉籽中多杀菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果

6．棉籽、植株和土壤中多杀菌素液相色谱测定谱图

见图1-31-2。

图1-31-2 棉籽、植株和土壤中多杀菌素液相色谱测定谱图