食品中山梨聚糖脂肪酸酯的测定方法

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第164页（3225字）

1．原理

山梨聚糖脂肪酸酯为山梨糖醇、山梨聚糖和山梨糖醇酐的各种脂肪酸酯混合物。食品中的山梨聚糖脂肪酸酯是通过将皂化分解后得到的山梨糖醇、山梨聚糖和山梨糖醇酐作为三甲基甲硅烷化物，由气相色谱定量山梨聚糖单脂肪酸酯。

2．试剂和溶液

2．1 乙醇(95%体积分数) 特级。

2．2 二甲苯 分析纯以上。

2．3 硅胶 100～200目色谱纯硅胶。

2．4 1，4，3，6－山梨糖醇酐将20g山梨糖醇和5g对－甲苯磺酸悬浊在60mL二甲苯中，边搅拌边用135～140℃回流4h，冷后，除去二甲苯。残留物加稀乙醇溶解，中和后过滤，滤液浓缩，得到的糖浆状物质溶解在甲醇中，加5g硅胶，蒸去甲醇，将残留物注入预先把硅胶分散在氯仿中充填的柱中。将40mL甲醇与200mL氯仿的混合液加入层析柱中，使其溶出，将溶出液减压浓缩，得1，4，3，6－山梨酸酯。

2．5 1，4－山梨聚糖 向20g山梨糖醇中，滴加浓硫酸及水各三滴，在140℃减压加热30min，加水后用活性炭脱色，用钡盐将硫酸除去后，减压浓缩，所得到的糖浆状物质溶于甲醇中，加5g硅胶，蒸去甲醇，将残留物加入预先用硅胶30g分散于氯仿中充填的层析柱中，将60mL甲醇同200mL氯仿的混合液通过层析柱，使之流出，将流出溶液减压浓缩即得到1，4－山梨聚糖。

2．6 α－(D)山梨糖醇 特级。

2．7 三甲基氮代硅烷 市售TMS化用。

2．8 对－甲苯磺酸 一级。

2．9 内标液 准确称取α－甲基－D(+)葡萄糖苷1．0mg，放入100mL容量瓶中，加氯仿溶解成100mL，密塞保存。

2．10 吡啶 甲硅烷化试剂。

2．11 正丁醇 特级。

2．12 1，1，1，3，3，3－六甲基二硅氨烷(Hexa methyl disilazane) 甲基硅烷化用。

2．13 无水硫酸钠 特级。

2．14 L－甲基－D(+)葡萄糖苷 特级。

2．15 TMS试剂 将2mL1，1，1，3，3，3－六甲基二硅氨烷和1mL三甲氯代硅烷加入10mL吡啶中。

3．仪器

带氢火焰的气相色谱仪(FID-GC)。

4．测定方法

4．1 样品溶液的制备。

4．1．1 水性食品：通常准确称取相当于山梨聚糖脂肪酸酯约50mg的样品10～20g，冷冻干燥，加20mL氯仿，在温水浴中加热回流1h后，过滤，残渣中加20mL氯仿，重复同样操作，合并全部滤液，作为样品溶液。

4．1．2 油性和其他食品：通常称取相当于山梨聚糖脂肪酸酯约50mg样品10～20g，加20mL氯仿，在温水浴上加热回流1h后，过滤，残渣中加20mL氯仿，重复同样操作，合并全部滤液，作为样品溶液。

4．2 标准液的配制 准确称取α－(D)山梨糖醇、1，4－山梨聚糖和1，4，3，6－山梨酸酯各100mg，混匀，加氯仿成100mL。准确取此液2ml，加氯仿定容至100mL，作为标准液(此液1mL含α－(D)山梨糖醇、1，4－山梨聚糖和1，4，3，6－山梨酸酯各20μg)。

4．3 测定。

4．3．1 测定条件：用带氢火焰鉴定器的气相色谱仪(FID-GC)。

填充剂：在60～80目硅烷处理的硅藻土担体上按3%比例涂覆JXR硅酮；

色谱柱：内径3mm，长1m；

柱温：以10℃／min的速度升温至120～320℃；

进样口和鉴定器温度：300℃；

载气：氮气50mL／min。

4．3．2 测定液配制：将样品溶液放入浓缩器中，减压浓缩蒸去氯仿，加100mL0．5mol／L氢氧化钠－乙醇溶液，加热回流1h，减压浓缩后，加120mL0．5mol／LHCl，加热回流1h，冷后，移入分液漏斗中，每次加25mL正己烷洗涤水层两次，弃去洗液，将水层放入浓缩器中，用0．5mol／L氢氧化钠－乙醇溶液中和，准确加1mL内标液，减压浓缩后加3g无水硫酸钠及25mL正丁醇，充分振摇，过滤，用25mL正己烷洗残渣，合并滤液和洗液，减压浓缩，除去正丁醇。准确加3mL吡啶、3mLTMS溶剂，振摇30min，作为测定液。

4．3．3 标准曲线的制作：准确吸取标准液0．1mL、0．5mL、1mL放入浓缩器中，分别加1mL内标液减压浓缩，除去氯仿，各加吡啶3mL、TMS溶液3mL，振摇30min，作为标准曲线用标准溶液。

取标准曲线用标准液各2μL，注入气相色谱仪，从所测得峰面积比分别绘制α－(D)山梨糖醇、1，4－山梨聚糖和1，4，3，6－山梨酸酯的标准曲线。

5．定量

取测定液2μL，注入气相色谱仪，所得α－(D)山梨醇、1，4－山梨聚糖和1，4，3，6－山梨酸酯各峰面积比，分别在各标准曲线上求出测定液中的各自浓度(μg／mL)，按下式计算出样品中的山梨聚糖脂肪酸酯含量(g／kg)。

6．分析结果的表述

式中 ρ₁——测定液中山梨醇浓度，μg／mL

ρ₂——测定液中1，4－山梨聚糖浓度，μg／mL

ρ₃——测定液中1，4，3，6－山梨酸酯浓度，μg／mL

V——测定液量，mL

m——取样量，g；

f——以山梨聚糖单硬脂酸酯换算时，f=0．27

注：将山梨聚糖脂肪酸酯换算成山梨聚糖单硬脂酸酯时，其中山梨糖醇等多元醇部分所占比例，因市售品在25%～29%范围内，计算中采用平均数27%。